Alendronato de Sódio
C4H12NNaO7P2·3H2O 325,12
Ácido fosfônico, (4-amino-1-hidroxibutilideno)bis-, sal monossódico, tri-hidratado.
Trihidrogênio (4-amino-1-hidroxibutilideno)difosfonato de sódio, trihidrato [121268-17-5].
» O Alendronato de Sódio contém não menos que 98,0 por cento e não mais que 102,0 por cento de C4H12NNaO7P2, calculado com base na secagem.
Embalagem e armazenamento - Conservar em recipientes bem fechados. Armazene em temperatura ambiente.
Padrões de referência USP<11>-
Alendronato de Sódio USP RS
Identificação-
A: Absorção infravermelha<197M>.
B: Atende aos requisitos do teste de chama para Sódio<191>.
Perda por secagem<731>- Seque-o a uma pressão não superior a 5 mm de mercúrio a 140 até peso constante: perde não menos que 16,1% e não mais que 17,1% do seu peso.
Metais pesados, Método III<231>: 0,001%.
Pureza cromatográfica -
Solução de Borato e Diluente - Prepare conforme indicado no ensaio.
Solução tampão - Transferir 5,88 g de citrato de sódio di-hidratado e 2,84 g de fosfato de sódio dibásico anidro para um balão volumétrico de 2-L, diluir com água até o volume e misturar. Ajuste com ácido fosfórico para um pH de 8 e passe a solução através de um filtro com porosidade de 0,5 µm ou mais fina.
9-Solução de cloroformato de fluorenilmetil- Prepare uma solução em acetonitrila contendo cerca de 4 mg de cloroformato de 9-fluorenilmetil por mL. Prepare esta solução fresca antes de usar.
Solução A- Prepare uma mistura filtrada e desgaseificada de solução tampão e acetonitrila (17:3).
Solução B- Prepare uma mistura filtrada e desgaseificada de acetonitrila e solução tampão (7:3).
Fase móvel - Use misturas variáveis ​​de Solução A e Solução B conforme indicado para o sistema cromatográfico. Faça ajustes se necessário (consulte Adequação do Sistema em Cromatografia<621>).
Solução de estoque padrão - Prepare uma solução de Alendronato de Sódio RS USP em Diluente com uma concentração conhecida de cerca de 0,6 mg por mL.
Solução padrão- Transfira 5,0 mL da solução estoque padrão para um tubo de centrífuga de polipropileno de 50 mL com tampa de rosca contendo 5 mL de solução de borato. Adicione 5 mL de acetonitrila e 5 mL de solução de cloroformato de 9-Fluorenilmetil e agite por 45 segundos. Deixe repousar à temperatura ambiente durante 30 minutos. Adicione 20 mL de cloreto de metileno e agite vigorosamente durante 1 minuto. Centrifugar durante 5 a 10 minutos e utilizar uma porção da camada aquosa superior transparente.
Solução padrão diluída - Diluir uma porção da solução padrão com Diluente para obter uma solução com uma concentração conhecida de cerca de 0,6 µg por mL. Usando 5 mL desta solução, proceda conforme indicado para a solução padrão, começando com “para um tubo de centrífuga de polipropileno de 50 mL com tampa de rosca”.
Branco de reagente - Usando uma porção de 5,0 mL de diluente, proceda conforme indicado para a solução padrão, começando com “para um tubo de centrífuga de polipropileno de 50 mL, com tampa de rosca”.
Solução de teste - Transferir cerca de 30 mg de Alendronato de Sódio, pesado exatamente, para um balão volumétrico de 50 mL, dissolver e diluir com Diluente até o volume e misturar. Usando um volume de 5,0 mL desta solução, proceda conforme indicado para a solução padrão, começando com “para um tubo de centrífuga de polipropileno de 50 mL, com tampa de rosca”.
Sistema cromatográfico (ver Cromatografia<621>)- O cromatógrafo líquido está equipado com um detector de 266 nm e uma coluna de 4,1 mm × 25 cm que contém o empacotamento L21. A taxa de fluxo é de cerca de 1,8 mL por minuto. A temperatura da coluna é mantida a cerca de 45ºC. O cromatógrafo é programado como se segue.
Tempo (minutos) Solução A (%) Solução B (%) Eluição
0 100 0 equilíbrio
0-15 100→50 0→50 gradiente linear
15-25 50→0 50→100 gradiente linear
25-27 0→100 100→0 gradiente linear
27-32 100 0 isocrático
Cromatografe a solução padrão e a solução padrão diluída e registre as respostas dos picos conforme indicado no Procedimento: o fator de cauda para o pico principal no cromatograma da solução padrão não é superior a 2,0; e o pico nesse locus no cromatograma da solução padrão diluída é detectável com uma relação sinal/ruído não inferior a 3.
Procedimento- Injete separadamente volumes iguais (cerca de 20 µL) da solução de teste e do branco do reagente no cromatógrafo, registre os cromatogramas e meça as respostas para todos os picos. Desconsiderar qualquer pico correspondente aos obtidos no branco do reagente. Calcule a porcentagem de cada impureza na porção de Alendronato de Sódio tomada pela fórmula:
100(ri/rs)
em que ri é a área de cada pico de impureza e rs é a soma de todos os picos de impureza e do pico principal: não é encontrado mais do que 0,1% de qualquer impureza individual e não é encontrado mais do que 0,5% do total de impurezas.
Ensaio -
Solução tampão - Transferir 14,7 g de citrato de sódio di-hidratado e 7,05 g de fosfato de sódio dibásico anidro para um balão volumétrico de 1-L, diluir com água até o volume, misturar e ajustar com ácido fosfórico até pH 8.
Diluente- Dissolver 29,4 g de citrato de sódio di-hidratado em água em um balão volumétrico de 1-L, diluir com água até completar o volume e misturar.
Solução de borato - Dissolver 19,1 g de borato de sódio em água em um balão volumétrico de 1-L, diluir com água até o volume e misturar.
9-Solução de cloroformato de fluorenilmetil- Prepare uma solução em acetonitrila contendo cerca de 0,5 mg de cloroformato de 9-fluorenilmetil por mL. Prepare esta solução fresca antes de usar.
Fase móvel - Prepare uma mistura filtrada e desgaseificada de solução tampão, acetonitrila e metanol (70:25:5). Faça ajustes se necessário (consulte Adequação do Sistema em Cromatografia<621>).
Preparação de estoque padrão - Prepare uma solução de Alendronato de Sódio RS USP em Diluente com uma concentração conhecida de cerca de 0,1 mg por mL. Calcule a concentração, CS, de alendronato de sódio anidro nesta solução.
Preparação padrão- Transfira 5,0 mL da preparação padrão para um tubo de centrífuga de polipropileno de 50 mL com tampa de rosca contendo 5 mL de solução de Borato. Adicione 5 mL de solução de cloroformato de 9-Fluorenilmetil e agite por 30 segundos. Deixe repousar à temperatura ambiente durante 25 minutos. Adicione 25 mL de cloreto de metileno e agite vigorosamente durante 1 minuto. Centrifugar por 5 a 10 minutos. Use uma porção da camada aquosa superior transparente.
Branco de reagente - Usando 5,0 mL de diluente, proceda conforme indicado para a preparação do padrão, começando com “para um tubo de centrífuga de polipropileno de 50 mL com tampa de rosca”.
Preparação do estoque de ensaio - Transferir cerca de 25 mg de Alendronato de Sódio, pesado exatamente, para um balão volumétrico de 250 mL, dissolver e diluir com Diluente até o volume e misturar.
Preparação do ensaio - Usando 5,0 mL da preparação de estoque do ensaio, proceda conforme indicado para a preparação padrão, começando com “para um tubo de centrífuga de polipropileno de 50 mL, com tampa de rosca”.
Sistema cromatográfico (ver Cromatografia<621>)- O cromatógrafo líquido está equipado com um detector de 266 nm e uma coluna de 4,1 mm × 25 cm que contém o empacotamento L21. A taxa de fluxo é de cerca de 1,2 mL por minuto. A temperatura da coluna é mantida a cerca de 35ºC. Cromatografe a preparação padrão e registe as respostas dos picos conforme indicado no Procedimento: a eficiência da coluna não é inferior a 1500 placas teóricas, o factor de cauda não é superior a 1,5 e o desvio padrão relativo para injecções replicadas não é superior a 2,0%.
Procedimento — Injete separadamente volumes iguais (cerca de 10 µL) da preparação padrão, da preparação do ensaio e do branco do reagente no cromatógrafo, registre os cromatogramas e meça as respostas para os picos principais. Calcule a quantidade, em mg, de C4H12NNaO7P2 na porção de Alendronato de Sódio tomada pela fórmula:
DCS (rU/rS)
em que D é o fator de diluição para a preparação do estoque de Ensaio; CS é definido na preparação de estoque padrão; e rU e rS são as respostas da área do pico para o ácido alendrónico obtido a partir da preparação do Ensaio e da preparação Padrão, respectivamente.