Penicilamina
C5H11NO2S 149,21
d-Valina, 3-mercapto-.
d-3-Mercaptovalina [52-67-5].
» A penicilamina contém não menos que 97,0 por cento e não mais que 102,0 por cento de C5H11NO2S, calculado com base seca.
Embalagem e armazenamento - Conservar em recipientes apertados.
Padrões de referência USP<11>-
Penicilamina RS da USP
USP Penicilina G Potássio RS
Dissulfeto de Penicilamina RS da USP
C10H20N2O4S2
Identificação-
A: Absorção infravermelha<197M>(50 mg em 300 mg).
B: Dissolver 10 mg em 5 mL de água e adicionar 1 gota de hidróxido de sódio 5 N e 20 mg de ninidrina: produz-se imediatamente uma cor azul ou violeta-azul.
C: Dissolva 20 mg em 4 mL de água, adicione 2 mL de solução de ácido fosfotúngstico (1 em 10) e aqueça quase até a ebulição: uma cor azul profunda é produzida imediatamente.
Rotação específica<781S>: entre 60,5 e 64,5.
Solução teste: 50 mg por mL, em hidróxido de sódio 1,0 N.
pH<791>: entre 4,5 e 5,5, em solução (1 em 100).
Perda por secagem<731>- Secar cerca de 100 mg, pesados ​​com precisão, em frasco capilar com rolha em vácuo a uma pressão não superior a 5 mm de mercúrio a 60ºC durante 3 horas: não perde mais de 0,5% do seu peso.
Resíduo de ignição<281>: não superior a 0,1%, sendo o resíduo carbonizado umedecido com 2 mL de ácido nítrico e 5 gotas de ácido sulfúrico.
Metais pesados, Método II<231>: não mais que 0,002%.
Limite de atividade da penicilina-
Tampão pH 2,5 - Dissolver 100 g de fosfato de potássio monobásico em água, adicionar 0,2 mL de ácido clorídrico, diluir com água até 1000 mL e misturar. Ajustar, se necessário, com ácido fosfórico ou com hidróxido de potássio 10 N até pH 2,5.
Preparação padrão- Prepare conforme indicado para Penicilina G na Tabela 1 em Antibióticos-Ensaios Microbianos 81, exceto para preparar uma solução estoque final contendo 100 Unidades de Penicilina G por mL e seis diluições de teste variando de 0,005 Unidade de Penicilina G por mL a 0,2 Unidade de Penicilina G por mL, e para usar uma dose média do Padrão de 0,050 Unidade de Penicilina G por mL.
Preparação para teste- Dissolver 1,0 g em água para perfazer 18,0 mL, transferir 9,0 mL desta solução para um separador, adicionar 20 mL de acetato de amila e 1 mL de tampão pH 2,5 e agitar. Deixe as camadas se separarem e retire a camada aquosa para um segundo separador, retendo o extrato de acetato de amila no primeiro separador. Verificar o pH da camada aquosa e se for superior a 3,0 ajustar com ácido clorídrico para pH 2,5 e extrair com 20 mL de acetato de amila. Descarte a camada aquosa e adicione o extrato de acetato de amila ao primeiro separador. Lave os extratos de acetato de amila combinados com 10 mL de tampão diluído pH 2,5 (1 em 10) e descarte a camada aquosa. Extraia o acetato de amila com 10,0 mL de Tampão No. 1 (consulte Tampões de Fosfato e Outras Soluções na seção Meios e Diluentes em Antibióticos – Ensaios Microbianos 81). Use uma porção do extrato tampão como solução de teste A. A uma porção de 5 mL do extrato adicione 0,1 mL de solução de penicilinase e incube de 36 a 37,5 por 60 minutos (solução de teste B).
Preparação do inóculo - Prepare conforme indicado em Antibióticos-Ensaios Microbianos 81, usando Micrococcus luteus (ATCC 9341) como organismo de teste e um inóculo que forneça zonas nítidas e claras de inibição de 17 mm a 21 mm de diâmetro com o nível de dose mediano do Padrão.
Procedimento- Proceda conforme indicado para o Método Cilindro - Placa em Antibióticos - Ensaios Microbianos 81, usando 10 mL de Meio 1 para a camada de base e 4 mL de Meio 4 inoculado para a camada de sementes, e incubando as placas em 29 a 31, exceto em cada placa de teste para preencher 2 cilindros com a solução de teste A, 2 cilindros com a solução de teste B e 2 cilindros com a dose média do padrão. Se a solução de teste A não apresentar zona de inibição, o teste é negativo para penicilina. Se a solução teste A produzir uma zona de inibição e a solução teste B não, a penicilina está presente. Determine seu nível a partir da curva padrão: não são encontradas mais de 0,01 unidades de penicilina G em cada mL de solução de teste A (0,2 unidades de penicilina G por g).
Mercúrio -
[nota-O ditizonato de mercúrio é sensível à luz. Execute este teste com luz suave.]
Solução estoque de ditizona - Dissolva 40 mg de ditizona em 1000 mL de clorofórmio.
Titulante ditizona - Diluir 30,0 mL de solução estoque de Ditizona com clorofórmio para 100,0 mL. Esta solução contém aproximadamente 12 mg de ditizona por L.
Solução padrão- Transferir 135,4 mg de cloreto mercúrico para um balão volumétrico de 100 mL, adicionar ácido sulfúrico 0,25 N até completar o volume e misturar. Esta solução contém o equivalente a 100 mg de Hg em 100 mL.
Solução padrão diluída - Pipetar 2 mL de solução padrão para um balão volumétrico de 100 mL, adicionar ácido sulfúrico 0,25 N ao volume e misturar. Cada mL desta solução contém o equivalente a 20 µg de Hg.
Padronização- Pipete 1 mL de solução padrão diluída em um separador de 250 mL e adicione 100 mL de ácido sulfúrico 0,25 N, 90 mL de água e 10 mL de solução de cloridrato de hidroxilamina (1 em 5). Em seguida, adicione 1 mL de solução de edetato dissódico (1 em 50), 1 mL de ácido acético glacial e 5 mL de clorofórmio, agite por 1 minuto, deixe separar e descarte a camada de clorofórmio. À solução adicionar titulante Ditizona, em porções de 0,3 mL a 0,5 mL, a partir de uma bureta de 10 mL. Após cada adição, agite a mistura 20 vezes, deixe a camada de clorofórmio se separar e descarte-a. Continue até que uma adição de titulante Ditizona permaneça verde após a agitação. Calcule a quantidade, em µg, de mercúrio equivalente a 1 mL de titulante Ditizona dividindo 20 pelo número de mL de titulante Ditizona adicionados.
Procedimento- Transfira 500 mg de Penicilamina para um frasco Kjeldahl de 650 mL contendo algumas contas de vidro, incline o frasco em um ângulo de cerca de 45º e adicione 2,5 mL de ácido nítrico através de um pequeno funil colocado na boca do frasco. Deixe a mistura repousar à temperatura ambiente até que se desenvolvam fumos de óxido nitroso e a reacção vigorosa desapareça (5 a 30 minutos). Adicione 2,5 mL de ácido sulfúrico pelo funil e aqueça, inicialmente suavemente e depois até a produção de vapores de trióxido de enxofre, depois esfrie. Adicione cuidadosamente 2,5 mL de ácido nítrico, aqueça novamente até a produção de vapores de trióxido de enxofre e esfrie. Repita o tratamento com ácido nítrico e aqueça, depois esfrie e adicione cuidadosamente 50 mL de água, enxaguando o funil e coletando os enxaguados no frasco. Remova o funil, ferva a solução até aproximadamente metade do seu volume (cerca de 25 mL) e deixe esfriar até a temperatura ambiente. Transferir para um separador de 250 mL com auxílio de água e adicionar água até perfazer cerca de 50 mL. Adicionar 1 mL de solução de edetato dissódico (1 em 50) e 1 mL de ácido acético glacial e extrair com pequenas porções de clorofórmio até que o último extrato de clorofórmio permaneça incolor. Descarte o extrato de clorofórmio e adicione 50 mL de ácido sulfúrico 0,25 N, 90 mL de água e 10 mL de solução de cloridrato de hidroxilamina (1 em 5). Adicione o titulante Ditizona, em porções de 0,3 mL a 0,5 mL, de uma bureta de 10 mL. Após cada adição, agite a mistura 20 vezes, deixe a camada de clorofórmio se separar e descarte-a. Continue até que uma adição de titulante Ditizona permaneça verde após a agitação. Calcule a quantidade de mercúrio presente: o limite é 10 µg (0,002%).
Limite de dissulfeto de penicilamina-
Diluente, fase móvel e solução de resolução - Prepare conforme indicado no ensaio.
Preparação padrão- Dissolva uma quantidade pesada com precisão de Dissulfeto de Penicilamina RS da USP em Diluente para obter uma solução com uma concentração conhecida de cerca de 0,025 mg por mL.
Preparação para teste- Use a preparação do ensaio.
Sistema cromatográfico - Proceda conforme indicado no Ensaio. Cromatografe a preparação padrão e registre as respostas do pico de dissulfeto de penicilamina conforme indicado no Procedimento: o desvio padrão relativo para injeções replicadas não é superior a 2,0%.
Procedimento- [nota-Use áreas de pico onde as respostas de pico são indicadas.] Injete separadamente volumes iguais (cerca de 20 µL) da preparação padrão e da preparação teste no cromatógrafo, registre os cromatogramas e meça as respostas para os picos de dissulfeto de penicilamina. Calcule a porcentagem de dissulfeto de penicilamina (C10H20N2O4S2) na penicilamina tomada pela fórmula:
100(CS/CU)(rU/rS)
em que CS é a concentração, em mg por mL, de dissulfeto de penicilamina RS da USP na preparação padrão, CU é a concentração, em mg por mL, de penicilamina na preparação de teste, e rU e rS são as respostas de pico de dissulfeto de penicilamina obtidas na preparação de teste e na preparação padrão, respectivamente: não mais que 1,0% de dissulfeto de penicilamina é encontrado.
Ensaio -
Diluente - Dissolva 1,0 g de edetato dissódico em água para perfazer 1000 mL de solução.
Fase móvel - Dissolva 6,9 g de fosfato de sódio monobásico e 0,20 g de 1-hexanossulfonato de sódio em água para perfazer 1000 mL de solução. Ajustar com ácido fosfórico a um pH de 3,0 ± 0,1 e filtrar através de um filtro adequado de 1 µm ou porosidade mais fina. Faça ajustes se necessário (consulte Adequação do Sistema em Cromatografia<621>).
Solução de resolução- Prepare uma solução em Diluente contendo cerca de 1 mg de Penicilamina RS da USP e 0,1 mg de Dissulfeto de Penicilamina da USP por mL.
Preparação padrão- Dissolva uma quantidade pesada com precisão de Penicilamina RS USP em Diluente para obter uma solução com uma concentração de cerca de 1,25 mg por mL.
Preparação do ensaio - Transferir cerca de 125 mg de Penicilamina, pesada com precisão, para um balão volumétrico de 100 mL, dissolver e diluir com Diluente até o volume e misturar.
Sistema cromatográfico (ver Cromatografia<621>)-O cromatógrafo líquido é equipado com um detector de 210-nm e uma coluna de 3,9-mm × 30-cm contendo o empacotamento L1. A taxa de fluxo é de cerca de 1,6 mL por minuto. Cromatografe a solução de resolução e registre as respostas conforme indicado no Procedimento: os tempos de retenção relativos são cerca de 0,7 para penicilamina e 1,0 para dissulfeto de penicilamina, e a resolução, R, entre o pico da penicilamina e o pico do dissulfeto de penicilamina não é inferior a 3,0. Cromatografe a preparação padrão e registre as respostas conforme indicado no Procedimento: o desvio padrão relativo para injeções replicadas não é superior a 1,0%.
Procedimento- [nota-Use áreas de pico onde as respostas de pico são indicadas. ] Injete separadamente volumes iguais (cerca de 20 µL) da preparação padrão e da preparação do ensaio no cromatógrafo, registre os cromatogramas e meça as respostas para os picos principais. Calcule a quantidade, em mg, de penicilamina (C5H11NO2S) na porção de Penicilamina tomada pela fórmula:
100C(rU / rS)
em que C é a concentração, em mg por mL, de Penicilamina RS da USP na preparação Padrão, e rU e rS são as respostas de pico da penicilamina obtidas na preparação do Ensaio e na preparação Padrão, respectivamente.