Procedimentos de inspeção
1. Aparência
-- Inspeção visual
2. Pureza (HPLC)
2.1 Instrumento
Cromatografia líquida de alta eficiência, detector PDA.
Balança analítica eletrônica
2.2 Reagente
Acetonitrila (grau cromatográfico), ácido trifluoroacético (grau cromatográfico)
2.3 Condições cromatográficas
2.3.1 Coluna: YMC-ODS-AM, 5 μl, 250x4,6 mm
2.3.2 Comprimento de onda de detecção: INC220nm
Taxa de fluxo: 1,0 mL/min
Tamanho da amostra: 10 μl (referência)
Diluente: acetonitrila
Tempo de coleta de dados: 25.00min
2.4 Preparação da fase móvel
Fase móvel A (0,1% de água com ácido trifluoroacético): absorção de precisão 2. Diluir o ácido trifluoroacético Oml com água até 2000m1, misturar bem e desgaseificar;
Fase móvel B (0,1% de ácido acetonitrila trifluoroacético): absorção precisa 2,0ml de ácido trifluoroacético foram diluídos para 2.000m1 com acetonitrila, misturados e desgaseificados;
2.5 Programa gradiente da fase móvel
Tempo (min) A% B%
0,00 90 10
13h00 10 90
18h00 10 90
18.01 90 10
23h00 90 10
2.6 Preparação da solução amostral
Pesar e dissolver 0,1g de amostra com acetonitrila e diluir para 100ml, agitar bem para usar, ou na mesma concentração. Prepare duas amostras em paralelo.
2.7 Determinação da Amostra
Analise a amostra de acordo com o seguinte procedimento de amostragem:
Mais de 1 injeção de solução em branco
Solução de amostra de 1 ponto 1#
Solução de amostra de 1 ponto 2#
2.8 Cálculo do resultado
2.8.1 O método de normalização da área de pico foi utilizado para calcular a pureza da HPLC deduzindo o espaço em branco.
2.8.2 O desvio médio relativo da pureza de duas agulhas não deve ser superior a 1%
2.8.3 Se os resultados de ambas as injeções atenderem aos critérios de aceitação, a pureza média será considerada como resultado final.
3, Ponto de fusão -- Instrumento de ponto de fusão RY-1
4. Método de detecção de perda por secagem
4.1 Instrumentos:
Forno de secagem termostático elétrico, equilíbrio de um em dez mil.
4.2 Procedimento:
Em um frasco de pesagem plano com tampa de boca esmerilada, peso constante e secagem excessiva, pese 1 grama de amostra (com precisão de 0,0001 grama). A amostra deve ser espalhada uniformemente no fundo do frasco de pesagem com espessura não superior a 10 mm, colocada em forno de secagem elétrico de temperatura constante, seca a 105 - 110 ℃ por 3 horas e, em seguida, levada para a sala de secagem, resfriada à temperatura ambiente e pesada.
Cálculo: Perda de peso seco%= (M1-M2) ÷M×100
Onde: M1: massa da amostra e do frasco de pesagem antes da secagem, g
M2: Massa da amostra e do frasco de pesagem após secagem, g
M: Massa da amostra, grama
5. Rotação específica
-- A rotação específica é medida de acordo com GB/T613-1988
Preparo da amostra: 0,5000g de amostra foram pesados com precisão e transferidos para um frasco volumétrico de 50ml limpo e seco com 20ml de acetato de etila. A garrafa foi rolhada e agitada para dissolver o acetato de etilo.
Teste: Ajuste o zero do giroscópio antes do teste, em seguida, preencha o tubo de ensaio com solução de amostra, registre o ângulo de rotação de deflexão e calcule a rotação específica da amostra usando a seguinte fórmula.
[α]20/D= (r×50) ÷(C×L)
Onde:
[α]20/D: Rotação específica da solução de amostra a 25℃
r: Rotação observada a 25°C para solução de amostra
50: Prepare o volume da solução de amostra (ml)
w: Peso da amostra (g)
L: Comprimento do tubo óptico (dm)
6. Análise TCL
Preparação da amostra: 0,5000g de amostra foram pesados ​​com precisão e transferidos para um frasco volumétrico de 50ml limpo e seco, foram adicionados 40ml de EtoH, o frasco foi tampado e agitado para dissolver e depois diluído até a balança com EtoH.
Preparação da amostra controle: 0,5000g de amostra foram pesados ​​com precisão e transferidos para um frasco volumétrico de 50ml limpo e seco, foram adicionados 40ml de água e 2 gotas de ácido clorídrico 6N, o frasco foi tampado e agitado para dissolver e depois diluído até a balança com água. Em seguida, pegue 0,5 do líquido acima e dilua com etanol em um frasco de 100ml até obter uma amostra de referência com escala de resíduos de aminoácidos de 1,0%.
Amostras de 10 microlitros foram coletadas com uma seringa de microamostragem e as amostras foram colocadas na placa de silicone GF254. Placas pontuais de 5 microlitros, 10 microlitros e 15 microlitros foram tomadas para pontos de comparação, respectivamente.
Agente revelador: n-butanol: ácido acético glacial: água =4:1:1.
Agente revelador de cor: solução de ninidrina metanol a 5%.
Operação de desenvolvimento de cor: primeiro, use um secador de cabelo para secar a placa de sílica gel desenvolvida, depois mergulhe-a em solução de ninidrina metanol a 5%, depois seque e leve ao forno em alta temperatura em um forno elétrico para desenvolvimento de cor.
Julgamento: Observe o tempo de cor do produto, tamanho do ponto, concentração de cor e comparação com o produto de controle, julgue que está nessa faixa.