SULFATO DE GENTAMICINA
[1405-41-0]
DEFINIÇÃO
Mistura de sulfatos de substâncias antimicrobianas produzidas por Micromonospora purpurea, tendo como principais componentes as gentamicinas C1, C1a, C2, C2a e C2b.
Conteúdo: mínimo 590 UI/mg (substância anidra).
PERSONAGENS
Aparência: pó higroscópico branco ou quase branco.
Solubilidade: livremente solúvel em água, praticamente insolúvel em etanol (96 por cento).
IDENTIFICAÇÃO
Primeira identificação: B, C.
Segunda identificação: A, C.
A. Cromatografia em camada fina (2.2.27).
Solução de teste. Dissolver 25 mg da substância a ser examinada em água R e diluir para 5 mL com o mesmo solvente.
Solução de referência. Dissolva o conteúdo de um frasco de sulfato de gentamicina CRS em água R e dilua para 5 mL com o mesmo solvente.
Placa: placa de sílica gel TLC R.
Fase móvel: a camada inferior de uma mistura de volumes iguais de amônia concentrada R, metanol R e cloreto de metileno R.
Aplicação: 10 μL.
Desenvolvimento: mais de 2/3 da placa.
Secagem: ao ar.
Detecção: pulverizar com solução de ninidrina R1 e aquecer a 110°C por 5 min.
Resultados: os 3 pontos principais no cromatograma obtido com a solução de teste são semelhantes em posição, cor e tamanho aos 3 pontos principais no cromatograma obtido com a solução de referência.
B. Examine os cromatogramas obtidos no teste para composição.
Resultados: o cromatograma obtido com a solução de teste (b) mostra 5 picos principais com os mesmos tempos de retenção que os 5 picos principais no cromatograma obtido com a solução de referência (a).
C. Dá a reação (a) de sulfatos (2.3.1).
TESTES
Solução S. Dissolva 0,8 g em dióxido de carbono - água livre R e dilua para 20 mL com o mesmo solvente.
Aparência da solução. A solução S é límpida (2.2.1) e não é mais intensamente colorida do que a intensidade 6 da faixa de soluções de referência da cor mais apropriada (2.2.2, Método II).
pH (2.2.3): 3,5 a 5,5 para solução S.
Rotação óptica específica (2.2.7): + 107 a + 121 (substância anidra).
Dissolva 2,5 g em água R e dilua para 25,0 mL com o mesmo solvente.
Composição. Cromatografia líquida (2.2.29): utilizar o procedimento de normalização levando em consideração apenas os picos devidos às gentamicinas C1, C1a, C2, C2a e C2b.
Solução de teste (a). Dissolver 25,0 mg da substância a ser examinada na fase móvel e diluir para 25,0 mL com a fase móvel.
Solução de teste (b). Dilua 5,0 mL da solução de teste (a) para 25,0 mL com a fase móvel.
Solução de referência (a). Dissolva 5 mg de gentamicina para identificação do pico de CRS (contendo impureza B) na fase móvel e dilua para 25 mL com a fase móvel.
Solução de referência (b). Dissolva 20,0 mg de sulfato de sisomicina CRS (impureza A) na fase móvel e dilua para 20,0 mL com a fase móvel.
Solução de referência (c). Diluir 1,0 mL de solução de referência (b) para 100,0 mL com a fase móvel.
Solução de referência (d). A 1 mL de solução de referência (b), adicione 5 mL de solução de teste (a) e dilua para 50 mL com a fase móvel.
Coluna:
- tamanho: l = 0,25 m, Ø = 4,6 mm;
- fase estacionária: sílica gel octadecilsilil para cromatografia R (5 μm);
- temperatura: 35℃.
Fase móvel. A 900 mL de dióxido de carbono-água livre R, adicione 7,0 mL de ácido trifluoroacético R, 250,0 μL de ácido pentafluoropropanóico R e 4,0 mL de carbonato-livre
solução de hidróxido de sódio R, deixe equilibrar e ajustar ao pH 2,6 usando solução de hidróxido de sódio livre de carbonato R diluída de 1 a 25. Adicione 15 mL de acetonitrila R e dilua até
1000,0 mL com dióxido de carbono - água livre R.
Taxa de fluxo: 1,0 mL/min.
Solução pós-coluna: solução de hidróxido de sódio isenta de carbonato R diluída de 1 a 25, previamente desgaseificada, que é adicionada sem pulso ao efluente da coluna usando uma bobina de mistura polimérica de 375 μL.
Taxa de fluxo da solução pós-coluna: 0,3 mL/min.