Glutationa
C10H17N3O6S307.32
Ácido pentanóico, 2-amino-5-[(R)-1-(carboximetilamino)-3-mercapto-1-oxopropan-2-ilamino]-5-oxo, (S);
N-(N-l--Glutamil-l-cisteinil)glicina [70-18-8].
DEFINIÇÃO
A glutationa contém NLT 98,0% e NMT 101,0% de C10H17N3O6S, como glutationa, calculada com base na secagem.
IDENTIFICAÇÃO
• A. Absorção infravermelha<197K>
• B. Rotação óptica, rotação específica<781S>
Solução de amostra: 40 mg/mL em água
Critérios de aceitação: 15,5° a 17,5°, a 20°C
ENSAIO
• Procedimento
Amostra: 500 mg de glutationa previamente seca
Sistema titulométrico
(Veja Titrimetria<541>.)
Modo: titulação direta
Titulante: iodo 0,1 N VS
Detecção de endpoint: visual
Branco: 50 mL de ácido metafosfórico (1 em 50)
Análise: Dissolver a Amostra em 50 mL de ácido metafosfórico (1 em 50) e titular com o Titulante.
Calcule a porcentagem de glutationa (C10H17N3O6S) na porção de glutationa tomada:
Resultado = [(V B) × N × F × 100]/W
V = volume de titulante da amostra (mL)
B = volume titulante do branco (mL)
N = normalidade do titulante (mEq/mL)
F = fator de equivalência, 307,32 mg/mEq
W = peso da amostra (mg)
Critérios de aceitação: 98,0%~101,0% na base seca
IMPUREZAS
Impurezas Inorgânicas
• Amônio
Solução padrão: 10 µg de amônio de uma solução diluída de cloreto de amônio
Solução amostra: 50 mg de Glutationa
Análise: Transfira a solução amostra e a solução padrão para frascos separados de 25 mL com tampa e dissolva em 1 mL de água. Adicione 0,30 g de óxido de magnésio. Fechar imediatamente após colocar um pedaço de papel manganês prateado quadrado de 5-mm, umedecido com algumas gotas de água, sob as tampas. Agitar, evitando projeções de líquido, e deixar repousar a 40ºC durante 30 min.
Critérios de aceitação: Se o papel prata manganês apresentar cor cinza, não é mais intenso que o padrão (NMT 200 ppm).
• Arsênico<211>: NMT 2 ppm
• Cloreto e Sulfato, Cloreto<221>: Dissolva 0,7 g com água para perfazer 15 mL. A solução não apresenta mais cloreto do que corresponde a 0,20 mL de ácido clorídrico 0,020 N (NMT 200 ppm).
• Cloreto e Sulfato, Sulfato 221: Dissolva 0,8 g em água para perfazer 15 mL. A solução não apresenta mais sulfato do que corresponde a 0,25 mL de ácido sulfúrico 0,020 N (NMT 300 ppm).
• Metais Pesados, Método I<231>: NMT 10 ppm
• Ferro<241>: NMT 10 ppm
• Resíduo na ignição<281>: NMT 0,1%
Impurezas Orgânicas
• Procedimento
Fase móvel: 6,8 g/L de dihidrogenofosfato de potássio com 2,02 g/L de 1-heptanosulfonato de sódio. Ajuste com ácido fosfórico para um pH de 3,0. Misture 970 mL desta solução com 30 mL de metanol.
Solução de adequação do sistema: 0,1 mg/mL de USP l-Fenilalanina RS, 0,5 mg/mL de USP Glutationa RS e 0,5 mg/mL de USP Ácido Ascórbico RS em Fase Móvel
Solução padrão: 0,01 mg/mL de Glutationa RS USP em Fase Móvel. [Nota – Esta solução tem uma concentração equivalente a 2,0% da solução amostra. ]
Solução amostra: 50 mg de glutationa em 100 mL de Fase Móvel. [Nota – Deixe a solução repousar por 5 minutos antes de usar. ]
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografia<621>, Adequação do Sistema.)
Modo: LC
Detector: UV 210nm
Coluna: 4,6-mm × 15-cm; Embalagem L1 de 5-µm
Temperatura da coluna: 30
Taxa de fluxo: Ajuste para que o tempo de retenção da glutationa seja de cerca de 5 min.
Tamanho da injeção: 10 μL
Adequação do sistema
Amostra: Solução de adequação do sistema
Requisitos de adequação
Resolução: NLT 5,0 entre os picos de ácido ascórbico e glutationa; e NLT 5,0 entre os picos de glutationa e l - fenilalanina
Desvio padrão relativo: NMT 1,5% para injeções replicadas
Análise
Amostras: solução padrão e solução amostral
Calcule a porcentagem de qualquer impureza na porção de Glutationa ingerida:
Resultado = (rU/rS) × (CS/CU) × 100
rU = resposta de pico de qualquer pico da solução de amostra que não seja a glutationa
rS = resposta máxima do pico de glutationa da solução padrão
CS = concentração de Glutationa RS USP na solução padrão (mg/mL)
CU = concentração de glutationa na solução amostra (mg/mL)
Critérios de aceitação
Impureza individual: NMT 1,5% para a impureza com o tempo de retenção relativo de cerca de 4
Impurezas totais: NMT 2,0%
TESTES ESPECÍFICOS
• Clareza e cor da solução
Solução de amostra: 0,1 g/mL em água
Análise: Utilizando tubos idênticos de vidro incolor, transparente, neutro, de base plana e diâmetro interno de 15-25 mm, comparar o líquido a ser examinado com a água, sendo a profundidade da camada de 40 mm. Compare as cores à luz do dia difusa, visualizando verticalmente contra um fundo branco.
Critérios de aceitação: A solução é límpida e incolor.
• Perda na secagem<731>: NMT 0,5%, 105°C por 3 h
REQUISITOS ADICIONAIS
• Embalagem e Armazenamento: Conservar em recipientes hermeticamente fechados.
• Padrões de referência da USP<11>
Ácido Ascórbico USP RS
Glutationa USP RS
USP l-Fenilalanina RS