Selenometionina
C5H11NO2Se 196.11
Ácido (S)-2-Amino-4-(metilselenil)butírico [1464-42-2].
DEFINIÇÃO
A selenometionina contém NLT 97,0% e NMT 103,0% de selenometionina (C5H11NO2Se) e contém NLT 39,0% e NMT 41,0% de selênio (Se), calculado como está.
IDENTIFICAÇÃO
• A. Absorção infravermelha<197K>
ENSAIO
• Procedimento
Fase móvel: 6,8 g/L de fosfato de potássio monobásico em água. Ajustar com ácido fosfórico a um pH de 2,75 ± 0,25.
Solução de adequação do sistema: 0,16 mg/mL de USP Selenometionina RS e 0,8 mg/mL de USP L-Metionina RS em fase móvel
Solução padrão: 0,16 mg/mL de Selenometionina RS USP em Fase Móvel
Solução amostra: 0,16 mg/mL de Selenometionina em Fase Móvel com sonicação. Passe através de um filtro de membrana com tamanho de poro de 0,45-µm.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografia<621>, Adequação do Sistema.)
Modo: LC
Detector: UV 220 nm
Coluna: 4,6-mm × 25-cm; gaxeta L1 com extremidade polar - capeamento
Taxa de fluxo: 1 mL/min
Tamanho da injeção: 20 μL
Adequação do sistema
Amostra: Solução de adequação do sistema
[Nota-Os tempos de retenção relativos para metionina e selenometionina são 0,8 e 1,0, respectivamente.]
Requisitos de adequação
Resolução: NLT 3.0 entre metionina e selenometionina
Fator de cauda: NMT 2,0 para o pico de selenometionina
Desvio padrão relativo: NMT 2,0% para o pico de selenometionina
Análise
Amostras: solução padrão e solução amostral
Calcule a porcentagem de selenometionina (C5H11NO2Se) na porção de selenometionina tomada:
Resultado = (rU/rS) × (CS/CU) × 100
rU= resposta de pico da solução de amostra
rS= resposta de pico da solução padrão
CS= concentração de Selenometionina RS USP na solução Padrão (mg/mL)
CU= concentração de Selenometionina na solução amostra (mg/mL)
Critérios de aceitação: 97,0%-103,0% no estado em que se encontra
IMPUREZAS
• Metais Pesados, Método I<231>: NMT 20 ppm
• Limite de Sódio
Solução estoque padrão: 10 µg/mL de sódio a partir de cloreto de sódio, previamente seco a 105ºC por 2 h
Soluções padrão: 0,2, 0,5 e 1,0 µg/mL de sódio. Pipete 2,0, 5,0 e 10,0 mL de solução estoque padrão em balões volumétricos separados de 100 mL. A cada frasco adicione 2,0 mL de solução de cloreto de potássio (1 em 5) e 1,0 mL de ácido clorídrico e dilua com água até o volume.
Solução amostra: Transferir 100 mg de Selenometionina para um balão volumétrico de 100 mL, adicionar 2,0 mL de solução de cloreto de potássio (1 em 5) e 1,0 mL de ácido clorídrico e diluir com água até o volume.
Condições instrumentais
(Veja Espectrofotometria e Luz-Espalhamento<851>.)
Modo: Espectrofotometria de absorção atômica
Comprimento de onda analítico: 589 nm
Lâmpada: Sódio oco - cátodo
Chama: Ar-acetileno
Análise
Amostras: soluções padrão e solução de amostra
Determine as absorbâncias das soluções. Trace as absorvâncias das soluções padrão versus suas concentrações (µg/mL de sódio) e desenhe a linha reta que melhor se ajusta aos pontos plotados. A partir do gráfico assim obtido, determine a concentração de sódio, CNa (µg/mL), na solução amostra.
Calcule a porcentagem de sódio na porção de Selenometionina tomada:
Resultado = (CNa/CSA) × F × 100
CNa= concentração de sódio na solução amostra (µg/mL), determinada a partir da linha de regressão
CSA= concentração de Selenometionina na solução amostra (mg/mL)
F= fator de conversão, 0,001 mg/µg
Critérios de aceitação: NMT 0,1%
• Pureza Cromatográfica
Solução padrão A: Transferir 50 mg de Selenometionina RS USP para um balão volumétrico de 10 mL, adicionar 2 mL de água, aquecer para dissolver, se necessário, e diluir com metanol até o volume.
Solução padrão B: Transferir 1,0 mL da solução padrão A para um balão volumétrico de 100 mL e diluir com metanol até completar o volume.
Solução amostra: Transferir 50 mg de Selenometionina para um balão volumétrico de 10 mL, adicionar 2 mL de água, aquecer para dissolver, se necessário, e diluir com metanol até o volume.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografia<621>, Adequação do Sistema.)
Modo: TLC
Absorvente: camada de 0,25-mm de mistura cromatográfica de sílica gel
Volume de aplicação: 10 µL
Solvente revelador: Butanol, ácido acético glacial e água (4:1:1)
Reagente de pulverização: 2 mg/mL de ninidrina em álcool
Análise
Amostras: Solução padrão A, Solução padrão B e Solução de amostra
Proceda conforme indicado para Cromatografia<621>, Cromatografia em Camada Fina. Deixe os pontos secarem e revele o cromatograma no solvente revelador até que a frente do solvente tenha se movido três quartos do comprimento da placa. Remova a placa da câmara de revelação, marque a frente do solvente e deixe o solvente evaporar. Localize as manchas na placa pulverizando com reagente Spray e secando-a a 110ºC durante 10 min.
Critérios de aceitação: NMT 1,0%. O valor de RF do ponto principal da solução amostra corresponde ao da solução padrão A; e nenhuma mancha, exceto a mancha principal da solução amostra, é maior ou mais intensa que a mancha principal da solução padrão B.
TESTES ESPECÍFICOS
• Rotação óptica, rotação específica<781S>
Solução amostra: 10 mg/mL em ácido clorídrico 1 N
Critérios de aceitação: +17,0 a +19,5
• Conteúdo de Selênio
[Cuidado - O selênio é tóxico; manuseie-o com cuidado.]
Solução estoque padrão: Dissolver 1 g de selênio metálico em um volume mínimo de ácido nítrico. Evaporar até à secura, adicionar 2 mL de água e evaporar até à secura. Repita a adição de água e a evaporação até à secura três vezes. Dissolver o resíduo em ácido clorídrico 3 N, transferir para um balão volumétrico de 1000 mL e diluir com ácido clorídrico 3 N até completar o volume. Esta solução contém 1000 µg/mL de selênio.
Soluções padrão: 20, 50 e 100 µg/mL de selênio. Pipete 2,0, 5,0 e 10,0 mL de solução estoque padrão em balões volumétricos separados de 100 mL. Diluir o conteúdo de cada frasco com água até o volume.
Solução amostra: 0,125 mg/mL de Selenometionina em água
Condições instrumentais
(Veja Espectrofotometria e Luz-Espalhamento<851>.)
Modo: Espectrofotometria de absorção atômica
Comprimento de onda analítico: 196 nm
Lâmpada: Selênio oco - cátodo
Chama: Ar - acetileno
Em branco: Água
Análise
Amostras: soluções padrão e solução de amostra
Determine as absorbâncias das soluções. Trace as absorvâncias das soluções padrão versus suas concentrações (µg/mL de selênio) e desenhe a linha reta que melhor se ajusta aos pontos plotados. A partir do gráfico assim obtido, determine a concentração de selênio, CSe (µg/mL), na solução amostra.
Calcule a porcentagem de selênio na porção de Selenometionina tomada:
Resultado = (CSe/CSA) × F × 100
CSe= concentração de selênio na solução amostra (µg/mL), determinada a partir da linha de regressão
CSA= concentração de Selenometionina na solução amostra (mg/mL)
F= fator de conversão, 0,001 mg/µg
Critérios de aceitação: 39,0%-41,0% no estado em que se encontra
REQUISITOS ADICIONAIS
• Embalagem e Armazenamento: Conservar em recipientes bem fechados.
• Padrões de referência da USP<11>
USP L-Metionina RS
USP Selenometionina RS