Entecavir
C12H15N5O3·H2O 295,29
6H-Purina-6-ona, 2-amino-1,9-dihidro-9-[(1S,3R,4S)-4-hidroxi-3-(hidroximetil)-2-metilenociclopentil]-, monohidrato;
9-[(1S,3R,4S)-4-Hidroxi-3-(hidroximetil)-2-metilenociclopentil]guanina monohidratada [209216-23-9]; UNII: 5968Y6H45M.
Anidro 277,28
DEFINIÇÃO
O Entecavir é um monohidrato e contém 98% de NLT e 102% de NMT de Entecavir (C12H15N5O3), calculado na base anidra.
IDENTIFICAÇÃO
Mude para ler:
• A. TESTES DE IDENTIFICAÇÃO ESPECTROSCÓPICA<197>, Espectroscopia de Infravermelho: 197A ou 197K (CN 1-Maio-2020)
• B. O tempo de retenção do pico maior da solução Amostra corresponde ao da solução Padrão, conforme obtido no Ensaio.
ENSAIO
• PROCEDIMENTO
Solução A: Acetonitrila e água (3:97)
Solução B: Acetonitrila
Fase móvel: Ver Tabela 1. [NOTA- Os tempos de eluição gradiente são estabelecidos em um sistema HPLC com volume de permanência de aproximadamente 1,0 mL.]
Tabela 1 Tempo (min) Solução A (%) Solução B (%)
0 100 0
8 100 0
50 77 23
75 17 83
90 100 0
100 100 0
Solução estoque de adequação do sistema: 1,0 mg/mL de USP Entecavir System Suitability Mixture RS em metanol
Solução de adequação do sistema: 0,2 mg/mL de Entecavir System Suitability Mixture RS da USP na Solução A da solução estoque de adequação do sistema
Solução estoque padrão: 1,0 mg/mL de USP Entecavir Monohidrato RS em metanol. Sonice conforme necessário.
Solução padrão: 0,2 mg/mL de Entecavir Monohidrato RS da USP na Solução A da solução estoque padrão
Solução estoque amostra: 1,0 mg/mL de Entecavir em metanol. Sonice conforme necessário.
Solução amostra: 0,2 mg/mL de Entecavir na Solução A da solução estoque amostra
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografia<621>, Adequação do Sistema.)
Modo: LC
Detector: UV 254nm
Coluna: 4,6-mm × 25-cm; Embalagem L1 de 5-µm
Taxa de fluxo: 1 mL/min
Volume de injeção: 10 μL
Adequação do sistema
Amostras: solução de adequação do sistema e solução padrão
[NOTA- Consulte a Tabela 2 para obter os tempos de retenção relativos dos componentes na solução de adequação do sistema.]
Requisitos de adequação
Resolução: NLT 3,5 entre entecavir 1-epímero e entecavir; NLT 2.0 entre entecavir e 8-hidroxi entecavir, Sistema
solução de adequação
Fator de cauda: 0,8-1,5 para entecavir, solução de adequação do sistema
Desvio padrão relativo: NMT 1,5%, solução padrão
Análise
Amostras: solução padrão e solução amostral
Calcule a percentagem de entecavir (C12H15N5O3) na porção de Entecavir tomada:
Resultado = (ru /rs) × (Cs /Cu) × 100
ru = pico de resposta do entecavir da solução amostra
rs = pico de resposta do entecavir da solução padrão
Cs = concentração de Entecavir Monohidrato RS USP na solução padrão (mg/mL)
Cu = concentração de Entecavir na solução amostra (mg/mL)
Critérios de aceitação: 98%-102% na base anidra
IMPUREZAS
• IMPUREZAS ORGÂNICAS
Solução A, Solução B, Fase móvel, Solução stock de adequação do sistema, Solução stock de adequação do sistema, Solução stock de amostra, Solução de amostra e Sistema cromatográfico: Proceda conforme indicado no Ensaio.
Solução estoque padrão: Use a solução padrão do ensaio.
Solução padrão: 0,2 µg/mL de Entecavir Monohidrato RS da USP na Solução A da solução estoque padrão
Adequação do sistema
Amostras: solução de adequação do sistema e solução padrão
[NOTA- Consulte a Tabela 2 para obter os tempos de retenção relativos dos componentes na solução de adequação do sistema.]
Requisitos de adequação
Resolução: NLT 3,5 entre entecavir 1-epímero e entecavir; NLT 2.0 entre entecavir e 8-hidroxi entecavir, solução de adequação do sistema
Fator de cauda: 0,8-1,5 para entecavir, solução de adequação do sistema
Desvio padrão relativo: NMT 10,0%, solução padrão
Análise
Amostras: Solução amostral e solução padrão
Calcule a porcentagem de cada impureza na porção de Entecavir tomada:
Resultado = (ru /rs) × (Cs /Cu) × (1/F) × 100
ru = resposta de pico de cada impureza da solução amostral
rs = pico de resposta do entecavir da solução padrão
Cs = concentração de Entecavir Monohidrato RS USP na solução padrão (mg/mL)
Cu = concentração de Entecavir na solução amostra (mg/mL)
F = fator de resposta relativo (ver Tabela 2)
Critérios de aceitação: Ver Tabela 2. Desconsiderar qualquer pico inferior a 0,05%.
Tabela 2
Nome Critérios de aceitação do fator de resposta relativo do tempo de retenção relativo, NMT (%)
Furoentecavir a 0,73 1,0 0,1
Entecavir 1-epímero b 0,93 1,0 0,1
Entecavir 3-epímero c 0,96 1,0 0,1
Entecavir 1.0 – -
8-Hidroxi entecavir d 1,03 0,67 0,1
Entecavir 4-epímero e 1,08 1,0 0,1
8-Metoxi entecavir f 1,27 0,67 0,1
4-Dimetilsilil entecavir g 1,84 1,0 0,1
Composto A 3.41 relacionado ao entecavir – -
Qualquer impureza não especificada – 1,0 0,1
Impurezas totais i – - 0,3
a 9-[(3aS,4S,6S,6aR)-3a,6-Dihidroxihexahidro-1H-ciclopenta[c]furano-4-il]guanina.
b 9-[(1R,3R,4S)-4-Hidroxi-3-(hidroximetil)-2-metilenociclopentil]guanina.
c 9-[(1S,3S,4S)-4-Hidroxi-3-(hidroximetil)-2-metilenociclopentil]guanina.
d 8-Hidroxi-9-[(1S,3R,4S)-4-hidroxi-3-(hidroximetil)-2-metilenociclopentil]guanina.
e 9-[(1S,3R,4R)-4-Hidroxi-3-(hidroximetil)-2-metilenociclopentil]guanina.
f 8-Metoxi-9-[(1S,3R,4S)-4-hidroxi-3-(hidroximetil)-2-metilenociclopentil]guanina.
g 9-[(1S,3R,4S)-4-Hidroxidimetilsilil-3-(hidroximetil)-2-metilenociclopentil]guanina.
h Apenas para informação; quantificado no teste para Limite do Composto A Relacionado ao Entecavir.
i Inclui a soma de todas as impurezas encontradas nos testes de Limite do Composto A Relacionado ao Entecavir e Impurezas Orgânicas.
• LIMITE DO COMPOSTO A RELACIONADO A ENTECAVIR
Solução A: 0,1% (v/v) de ácido trifluoroacético em água
Solução B: 0,1% (v/v) de ácido trifluoroacético em acetonitrila
Fase móvel: Ver Tabela 3. [ NOTA- Os tempos de eluição gradiente são estabelecidos em um sistema HPLC com um volume de permanência de
aproximadamente 1,0 mL.]
Tabela 3
Tempo (min) Solução A (%) Solução B (%)
0 65 35
8 53 47
8,1 65 35
11 65 35
Solução padrão: 2 µg/mL de Composto A RS relacionado ao Entecavir da USP em metanol
Solução amostra: 1,0 mg/mL de Entecavir em metanol. Sonice conforme necessário.
Sistema cromatográfico
(Ver Cromatografia<621>, Adequação do Sistema.)
Modo: LC
Detector: UV 254nm
Coluna: 4,6-mm × 5-cm; Embalagem L1 de 5-µm
Temperaturas
Amostrador automático: 4°
Coluna: 30°
Taxa de fluxo: 2 mL/min
Volume de injeção: 10 μL
Adequação do sistema
Amostra: Solução padrão
Requisitos de adequação
Fator de cauda: 0,8-1,5
Desvio padrão relativo: NMT 3,0%
Análise
Amostras: solução padrão e solução amostral
Calcule a porcentagem do composto A relacionado ao entecavir na porção de Entecavir tomada:
Resultado = (ru /rs) × (Cs /Cu) × 100
ru = resposta máxima do composto A relacionado ao entecavir da solução amostra
rs = resposta máxima do composto A relacionado ao entecavir da solução padrão
Cs = concentração de Composto A RS relacionado ao Entecavir da USP na solução padrão (mg/mL)
Cu = concentração de Entecavir na solução amostra (mg/mL)
Critérios de aceitação: NMT 0,1%
TESTES ESPECÍFICOS
• DETERMINAÇÃO DE ÁGUA<921>, Método I, Método Ic: 5,5%-7,0%
• ROTAÇÃO ÓPTICA<781S>, Procedimentos, Rotação Específica
Solução amostra: 10 mg/mL de Entecavir em mistura de dimetilformamida e metanol (50:50)
Critérios de aceitação: +24° a +30°
REQUISITOS ADICIONAIS
• EMBALAGEM E ARMAZENAGEM: Conservar em recipientes bem fechados e protegidos da luz. Armazene em temperatura ambiente.
• PADRÕES DE REFERÊNCIA USP<11>
USP Entecavir Monohidrato RS
Composto A RS relacionado ao Entecavir da USP
3-Benzil-4-silil entecavir;
9-[(1S,3R,4S)-4-Dimetilfenilsilil-3-(benziloximetil)-2-metilenociclopentil]guanina.
C27H31N5O2Si 485,65
Mistura RS de adequação do sistema Entecavir da USP
A mistura contém entecavir monohidratado e as seguintes impurezas (outras impurezas também podem estar presentes):
Entecavir 1-epímero.
8-Hidroxi entecavir.
8-Metoxi entecavir.

Contato: Dr.

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